Как перевести системы культивирования мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из сывороточно-содержащих в бессывороточные системы
Вы здесь: Дом » Новости » Как перевести системы культивирования мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из сывороточно-содержащих в бессывороточные системы
Как перевести системы культивирования мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из сывороточно-содержащих в бессывороточные системы
Просмотры:0 Автор:Pедактор сайта Время публикации: 2025-12-15 Происхождение:Работает
Мы полностью признаем разнообразие промышленных реалий: некоторые клиенты уже создали банки стволовых клеток в рамках систем сыворотка/сыворотка-заменитель или завершили первичную изоляцию клеток с использованием протоколов, содержащих сыворотку. Для команд с определенной исследовательской или производственной базой общей технической проблемой является то, как плавно и эффективно преобразовать существующие клеточные ресурсы в систему бессывороточной культуры, обеспечивая при этом стабильность жизнеспособности, фенотипа и функции клеток. В чем секрет плавного перехода к бессывороточной системе культивирования? На какие ключевые моменты следует обратить внимание во время преобразования? Есть ли успешные кейсы для справки? Сегодня мы поделимся мыслями на эти темы.
Ключевые соображения по переводу МСК из сыворотки/среды-заменителя сыворотки в бессывороточную среду
1. Пищеварение и прекращение
Используйте оригинальный метод расщепления: при непосредственном переносе клеток, культивированных в сыворотке или средах-заменителях сыворотки, в среду, не содержащую сыворотки, необходимо сохранить исходный метод расщепления, а также метод терминации, специфичный для исходной среды. Затем центрифугируйте для удаления пищеварительных ферментов.
Избегайте повреждений, вызванных пищеварением: МСК, культивированные в сыворотке или средах-заменителях сыворотки, обычно демонстрируют сильную адгезию. Переваривание трипсином или подобными ферментами может потребовать более длительного времени, что увеличивает риск повреждения клеток. Поэтому крайне важно подсчитывать клетки перед посевом и инокулировать в зависимости от количества жизнеспособных клеток.
Рекомендуется предварительное тестирование: в некоторых образцах клеток может наблюдаться аномальный рост. Целесообразно заранее проверить эффективность роста конкретных клеток в бессывороточной среде.
2. Плотность посева
Отрегулируйте плотность путем прохождения клеток:
Клетки на третьем пассаже или раньше: посев при 8000 жизнеспособных клеток/см²;
Клетки после пассажа 3: Посев при концентрации 10 000 жизнеспособных клеток/см².
Учитывайте состояние клеток: если клетки были заморожены в среде, содержащей сыворотку, обычно возможен прямой перенос в среду без сыворотки. Однако если возникают проблемы с адаптацией, рекомендуется один раз оттаять и пассировать в исходной среде перед переходом на бессывороточную систему.
3. Метод посева
Избегайте промывания дна культурального сосуда: добавьте среду вдоль верхней поверхности или боковой стенки культурального сосуда; никогда не лейте непосредственно на дно (поверхность роста клеток). Это предотвращает образование «озёрных» или «речных» пустых участков, которые могут препятствовать адгезии и росту клеток.
Стандартная процедура работы: Медленно добавляйте среду вдоль стенок сосуда или непосредственно на дно с помощью пипетки. Аккуратно наклоните сосуд, чтобы обеспечить равномерное смачивание поверхности роста, затем добавьте клеточную суспензию. Аккуратно вращайте сосуд, чтобы равномерно распределить клетки.
4. Мониторинг прохода и культуры
Оптимальное время пассажа: после переноса клеток в бессывороточную среду инкубируйте в течение 72 часов. Мониторинг под микроскопом – пассаж, когда слияние клеток достигает 90%. Избегайте слияния, превышающего 100%, поскольку перенаселенность, расслоение или образование сфероидов могут привести к старению клеток, дифференциации или серьезному повреждению во время пищеварения.
Меры предосторожности при прохождении:
а. Используйте мягкий пищеварительный фермент стволовых клеток. Отрегулируйте объем фермента и время переваривания в зависимости от типа культурального сосуда (обычно 3–5 минут при комнатной температуре).
б. Сразу после расщепления разбавьте клеточную суспензию 2 объемами полной среды или супернатанта и осторожно пипетируйте. Завершите весь процесс в течение 10 минут и быстро центрифугируйте, чтобы свести к минимуму механические повреждения.
в. Ресуспендируйте клетки после центрифугирования и повторно посейте при плотности пассажа, упомянутой выше (8000 или 10 000 жизнеспособных клеток/см²).
5. Оттаивание замороженных клеток из сыворотки/системы заменителей сыворотки
Для замороженных-оттаянных клеток рекомендуется сначала оттаять и пассировать один раз в исходной среде, а затем переходить на среду, не содержащую сыворотки. Если предпринята попытка прямого оттаивания в бессывороточной среде, проведите эксплуатационные испытания в соответствии с руководством по эксплуатации, чтобы подтвердить нормальную адгезию и пассаж клеток. Если возникнут проблемы, вернитесь к промежуточному этапу перехода.
Во время оттаивания следуйте тем же рекомендациям по добавлению среды (избегайте промывания дна), плотности посева (на основе количества жизнеспособных клеток и правил пассажа) и процедур расщепления/центрифугирования, как и при обычном пассаже.
Технологические решения и практические примеры Yocon для преобразования систем
1. Импортированный заменитель сыворотки → Система Yocon
Замороженные-размороженные клетки были непосредственно перенесены в бессывороточную культуральную систему Yocon. Стабильность фенотипа достигалась после 3 последовательных пассажей без последующих отклонений – конверсия завершилась успешно.
2. Отечественный заменитель сыворотки → Yocon System
Замороженные-размороженные клетки были непосредственно перенесены в бессывороточную культуральную систему Yocon. Клетки демонстрировали нормальную адгезию и расширение, со стабильным количеством и производительностью клеток после непрерывных пассажей.
3. Импортированный заменитель сыворотки → Система Yocon
Замороженные-размороженные клетки были непосредственно перенесены в бессывороточную культуральную систему Yocon. В первые три дня рост был немного медленнее из-за исходного состояния клеток. После полной замены среды на 6-й день клетки восстановили плотную, распределенную морфологию – успешная конверсия системы.
4. Замороженные клетки фетальной бычьей сыворотки (FBS) → Yocon System
Посевные клетки P2, замороженные в импортированной базальной среде + FBS, непосредственно размораживали в бессывороточной культуральной системе Yocon. Незначительные проблемы с адгезией возникали из-за исходного состояния клеток, но пролиферация клеток и способность к адгезии полностью восстанавливались к 7 дню после пассажа.
YOCON
Бессывороточная культура стала явной тенденцией развития в области клеточной терапии. Он фундаментально решает проблемы неопределенных компонентов, изменчивости от партии к партии и рисков заражения животного происхождения, связанных с культурами, содержащими сыворотку, отвечая строгим требованиям стандартизации, безопасности и согласованности клеточных продуктов клинического уровня. Благодаря постоянному совершенствованию соответствующих правил и растущему рыночному спросу бессывороточные среды химического состава представляют собой неизбежный путь к крупномасштабному, высококачественному и автоматизированному производству стволовых клеток. Это не просто технологическая модернизация, но и решающий промышленный шаг на пути к продвижению терапии стволовыми клетками от лабораторных исследований к широкому клиническому применению.
